دستورالعمل جامع واکسیناسیون موش: راهنمای علمی ۱۴۰۴ برای تحقیقات دامپزشکی

مقدمه: اهمیت واکسیناسیون موش در تحقیقات علمی

واکسیناسیون موش یک مرحله کلیدی در تحقیقات علمی، تولید آنتی‌بادی، و مطالعه بیماری‌های عفونی است. این فرآیند با ارائه آنتی‌ژن به شکل مناسب، پاسخ ایمنی هومورال را القای می‌کند و منجر به تولید سلول‌هایی می‌شود که آنتی‌بادی علیه آنتی‌ژن ترشح می‌کنند. در این مقاله، به بررسی دقیق مراحل واکسیناسیون، ادجوانت‌ها، و نکات ایمنی می‌پردازیم تا محققان و دامپزشکان بتوانند آزمایش‌های خود را با دقت بالا انجام دهند. این روش نه تنها در تحقیقات پزشکی انسانی مفید است، بلکه در دامپزشکی برای مطالعه بیماری‌های حیوانی کاربرد دارد.

واکسیناسیون موش با استفاده از آنتی‌ژن رقیق‌شده در PBS استریل و مخلوط با ادجوانت انجام می‌شود. موش‌های آزمایشگاهی مانند BALB/c در این فرآیند استفاده می‌شوند و نیاز به دقت بالا در مراحل دارد. در ادامه، مراحل روزبه‌روز و نکات ایمنی را بررسی می‌کنیم.

واکسیناسیون موش در آزمایشگاه – همراه پت ۱۴۰۴

واکسیناسیون موش چیست و چگونه کار می‌کند؟

واکسیناسیون موش یک فرآیند ایمن‌سازی است که با تزریق آنتی‌ژن به همراه ادجوانت، سیستم ایمنی موش را تحریک می‌کند تا آنتی‌بادی تولید کند. این آنتی‌بادی‌ها برای تحقیقات علمی، تولید داروهای ایمنی، و مطالعه بیماری‌ها استفاده می‌شوند.

موش‌ها در شرایط آزمایشگاهی باید سالم و مراقبت‌شده باشند تا پاسخ آنتی‌بادی خوبی تولید کنند. آموزش صحیح طبق مقررات کشور برای هر روشی که شامل حیوانات می‌شود، ضروری است. تزریق و خونگیری نیاز به مهارت و صبر دارد تا حیوان بدون درد و استرس بماند (خدمات آزمایشگاهی).

مراحل روزبه‌روز واکسیناسیون موش

برنامه واکسیناسیون معمولاً به شرح زیر است:

روز اول

• آنتی‌ژن را در 150 تا 200 میکرولیتر PBS استریل برای هر حیوان رقیق کنید.
• آنتی‌ژن را با 150 تا 200 میکرولیتر ادجوانت مخلوط کنید (به پیوست D مراجعه کنید).
• اگر در اروپا کار می‌کنید، دو موش ماده BALB/c را به صورت داخل صفاقی یا اگر در بریتانیا کار می‌کنید به صورت زیر جلدی تزریق کنید (به پیوست A مراجعه کنید).

روز دهم تا پانزدهم

• تزریق را تکرار کنید.

روز بیستم تا سی

• تزریق این بار باید حاوی آنتی‌ژن فقط در PBS استریل باشد (بدون ادجوانت). این تزریق می‌تواند به صورت داخل صفاقی یا زیر جلدی انجام شود.

روز سی یا چهل

• یک خونریزی دم از موش‌های واکسینه‌شده جمع‌آوری کنید.
• اجازه دهید خون لخته شود.
• رقت‌های سریالی از سرم حاصل را در PBS انجام دهید.
• نمونه‌های سرم را با روش الایزا در برابر آنتی‌ژن و/یا تکنیک رنگ‌آمیزی دیگر آزمایش کنید. نتایج باید با نتایج به دست آمده با استفاده از رقت مشابه سرم معمولی موش مقایسه شود. این مرحله به شما امکان می‌دهد بررسی کنید که آیا حیوانات آنتی‌ژن را تشخیص داده‌اند و تشخیص دهید که کدام موش بهترین پاسخ ایمنی را دارد.
• حداقل 3 هفته بین تزریق سوم و تقویت آنتی‌ژن نهایی قبل از انجام فیوژن فاصله بگذارید.
• بوست نهایی را به صورت داخل وریدی (به ضمیمه C مراجعه کنید) یا داخل صفاقی سه یا چهار روز قبل از روز فیوژن تزریق کنید.
• این تقویت نهایی می‌تواند حاوی 100-200 میکروگرم آنتی‌ژن رقیق‌شده در 150 میکرولیتر PBS استریل باشد.
• سه تا چهار روز پس از تقویت نهایی، باید موش را قربانی کنید، طحال را به صورت آسپتیک بردارید و در ظرف استریل حاوی 5 میلی لیتر محیط قرار دهید.
• تکنیک فیوژن را ادامه دهید.

NB حیوانات سالم و مراقبت‌شده برای به دست آوردن پاسخ آنتی‌بادی خوب ضروری هستند.

کاملاً ضروری است که آموزش صحیح طبق مقررات کشور مربوطه برای هر روشی که شامل حیوانات می‌شود به طور رضایت بخش تکمیل شود. علاوه بر آموزش، تزریق و خونریزی حیوانات به صورت ایمن و بدون درد نیاز به مهارت و صبر دارد.

پیوست اول: تزریق داخل صفاقی

غلظت آنتی‌ژن باید بین 50-100 میکروگرم در هر موش باشد. حجم تزریقی نباید بیش از 300 میکرولیتر در هر موش باشد.

روش زیر برای دو موش است:

• آنتی‌ژن باید در حدود 300 میکرولیتر PBS رقیق شود و با 300 میکرولیتر ادجوانت در یک لوله اپندورف مخلوط شود.
• اپندورف را گرداب کنید تا ادجوانت دوباره معلق شود و امولسیون بین آنتی‌ژن آبی و ادجوانت مبتنی بر روغن تشکیل شود. محلول باید در این مرحله یکنواخت سفید و بدون جدا شدن به دو لایه باشد.
• محلول را داخل سرنگ 1.0 میلی لیتری بکشید.
• یک سوزن گیج 23 یا 25 روی سرنگ قرار دهید.
• هر حباب هوای موجود در لوله سرنگ یا سوزن را با فشار دادن دقیق پیستون تا زمانی که امولسیون به سوزن برسد جابجا کنید.
• با استفاده از یک دست موش را محکم نگه دارید و با دست دیگر امولسیون آنتی‌ژن کمکی را با دقت به داخل حفره صفاقی تزریق کنید.
• توجه: همه ادجوانت‌ها به طور بالقوه مضر هستند. در هنگام تهیه و تزریق آنتی‌ژن مراقب باشید.
• حیوان را به قفس خود برگردانید و به مدت پنج دقیقه با هم بمانید تا مطمئن شوید که همه چیز خوب است.

پیوست دوم: تزریق داخل وریدی

• سرنگ 1 میلی لیتری را با امولسیون آنتی‌ژن پر کنید.
• یک سوزن گیج 27 یا 30 را روی سرنگ قرار دهید.
• حیوان را با دقت نگه دارید.
• دم را در یک کاسه آب گرم خیس کنید. این کار به باز شدن رگ‌های دم کمک می‌کند.
• دم را با دستمال کاغذی خشک کنید.
• دم را با یک دست محکم بگیرید و سوزن را به داخل یکی از رگ‌ها هدایت کنید.
• اطمینان حاصل کنید که سوزن داخل رگ است، تزریق را به آرامی انجام دهید.
• چند ثانیه مکث کنید.
• سوزن را بردارید و حیوان را به قفسش برگردانید.
• برای اطمینان از اینکه همه چیز خوب است، حیوان را به مدت پنج دقیقه مشاهده کنید.

پیوست سوم: ادجوانت‌ها

دو ادجوانت اصلی که استفاده می‌کنیم عبارتند از ادجوانت فروند (کامل یا ناقص) (BD Difco 263810 و BD Difco 263910) و طلای Titremax (Sigma T2684).

هر دو در ایجاد پاسخ ایمنی بسیار خوب هستند.

ادجوانت فروند

کمک کامل فروند (CFA)
CFA یک روغن معدنی است که حاوی سوسپانسیونی از مایکوباکتریوم‌های کامل یا پودر شده با حرارت کشته شده است. هنگامی که با محلولی از آنتی‌ژن مورد نظر امولسیون می‌شود تا یک امولسیون آب در روغن تشکیل شود، CFA در تقویت پاسخ‌های ایمنی سلولی و هومورال به آنتی‌ژن تزریقی مؤثر است. فعالیت کمکی آن در نتیجه آزادسازی مداوم آنتی‌ژن‌ها از امولسیون روغنی و تحریک یک پاسخ ایمنی ذاتی محلی است که منجر به افزایش ایمنی تطبیقی می‌شود. یکی از اجزای ضروری این پاسخ یک واکنش التهابی شدید در محل رسوب آنتی‌ژن است که در نتیجه هجوم لکوسیت‌ها و تعامل آن‌ها با آنتی‌ژن‌ها ایجاد می‌شود.

کمکی ناقص فروند (IFA)
برای اکثر کاربردها، CFA معمولاً فقط برای ایمن‌سازی اولیه ضروری است، در حالی که ادجوانت فروند ناقص (IFA)، که فاقد مایکوباکتری است، ادجوانت انتخابی برای ایمن‌سازی‌های بعدی است.

طلای تیترمکس

TitreMax Gold یک ادجوانت جدید و بهبود یافته آب در روغن است. TitreMax Gold Adjuvant شامل سه ماده ضروری است: یک بلوک کوپلیمر (CRL-8300)، اسکوالن (روغن قابل سوخت و ساز)، و یک تثبیت‌کننده ریز ذرات منحصر به فرد. مخصوصاً با اسکوالن برای تولید امولسیون‌های آب در روغن پایدار فرموله شده است. امولسیون کردن آن بسیار راحت‌تر از ادجوانت فروند است. امولسیون به دست آمده چسبناک کمتری دارد و تزریق آن را از طریق سوزن‌های کوچک آسان می‌کند. به نظر می‌رسد که TitreMax Gold کمتر سمی است و به اندازه سایر کمک‌های کمکی مؤثر است.

اشتراک‌گذاری مطلب

این راهنما را با دیگر محققان و علاقه‌مندان به علوم دامپزشکی به اشتراک بگذارید تا تحقیقاتشان را بهبود بخشند!